羊传染性胸膜肺炎支原体RPS11基因的原核表达及间接ELISA检测方法的建立

更新时间:2023-05-28

【摘要】本研究以贵州羊传染性胸膜肺炎支原体分离株(GM01株)基因组DNA为模板,通过PCR技术扩增目的基因RPS11,并克隆到pET28a(+)载体,成功构建了重组质粒pET28a-RPS11,将其转化至大肠杆菌Rosetta感受态细胞中诱导表达重组RPS11蛋白并建立了羊传染性胸膜肺炎间接ELISA检测方法。SDS-PAGE分析表明,重组蛋白分子量为19 kDa,纯度为85%,具有良好的抗原性及特异性;检测方法经条件优化,确定了抗原包被浓度为1μg/mL,血清稀释度为1∶400,酶标二抗工作浓度为1∶4000,底物显色时间为10min。用建立的间接ELISA检测方法与羊传染性胸膜肺炎间接血凝检测试剂分别对临床180份血清进行检测,阳性率分别为35.0%和29.44%,总符合率达91.11%。本研究成功完成了RPS11蛋白的重组表达,制备出特异性较好的抗体,建立的间接ELISA检测方法为羊传染性胸膜肺炎的血清学检测诊断及流行病学调查提供了有效的技术手段。

【关键词】 羊传染性胸膜肺炎 RPS11 原核表达 间接ELISA

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